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建立茶葉中的鄰苯基苯酚含量的測定方法，利用甲醇:水(7:3)作為萃取劑,萃取方法選擇超聲波萃取法，萃取出茶葉 中的鄰苯基苯酚，采用紫外分光光度法，建立鄰苯基苯酚標(biāo)準(zhǔn)曲線對其進行含量測定。對萃取劑，緩沖液，適宜 pH 值等條件進 行優(yōu)化。優(yōu)化后的鄰苯基苯酚濃度與吸光度具有良好線性關(guān)系，線性相關(guān)系數(shù)為 0.994，加標(biāo)回收率在 90.1%耀91.2%之間，證明該 方法切實可行。該研究為通過超聲波萃取結(jié)合紫外分光光度法能夠測定茶葉中鄰苯基苯酚，并且該方法具有準(zhǔn)確度高，反應(yīng)靈敏， 操作簡便等優(yōu)點。 

食品的三大機能：營養(yǎng)學(xué)特性、嗜好性感官品質(zhì)特征、對人體的調(diào)節(jié)技能 或保健機能。茶葉是為數(shù)不多的同時具備這三大機能要求的食品。茶不 僅能夠帶給人們味覺的享受，還能夠促進人們的身體健康，種種好處使得茶 受到越來越多人的歡迎。飲茶、品茶已經(jīng)成為人們生活中*的一部分。 隨著茶葉風(fēng)靡，越來越多人開始重視茶葉的質(zhì)量和安全問題。但是在茶 葉的生長過程中，為了殺蟲除菌、提高增產(chǎn)率，不可避免的會使用到農(nóng)藥，農(nóng) 藥會殘留在茶葉上極難清除，也不可避免的會對環(huán)境和人類健康產(chǎn)生危害或 者有潛在的威脅。有資料顯示，中國的茶樹除了有機茶被限制不能噴灑農(nóng)藥， 99%的茶樹都或多或少的噴撒了農(nóng)藥?，F(xiàn)在世界上有近 30 億人飲用茶，世界 各地都有種植茶葉和茶葉進出口貿(mào)易，在如此大的需求面前，許多國家制定 的農(nóng)藥殘留相關(guān)法規(guī)并沒有那么完善，大部分國家只標(biāo)明了茶葉中農(nóng)藥殘留 的大標(biāo)準(zhǔn)，而并不是禁止農(nóng)藥殘留的存在。同時各個國家對茶葉的農(nóng)藥殘 留相關(guān)的法律法規(guī)也不統(tǒng)一，例如，歐洲因為地域氣候關(guān)系不適合種植茶葉， 同時對食品的安全衛(wèi)生要求更高，因此它對茶葉農(nóng)藥殘留的標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)格，而 中國的產(chǎn)茶量和出口，但由于國外貿(mào)易壁壘日趨嚴(yán)格，導(dǎo)致了 中國茶葉的出口量減少[1]，主要原因是因為中國關(guān)于茶葉農(nóng)藥殘留量的指標(biāo) 還未完善[2]。這幾年茶葉農(nóng)殘相關(guān)國家標(biāo)準(zhǔn)不斷更新出臺，可見茶葉中農(nóng)藥殘 留問題越來越受到重視[3]。 近五年，歐盟對茶葉相關(guān)法規(guī)進行了多達 69 次修訂，茶葉農(nóng)殘標(biāo)準(zhǔn)限制 對象已經(jīng)從茶園中使用的一般農(nóng)藥擴展到草甘膦等除草劑，再到蒽醌、多氯 酸鹽等環(huán)境污染物。近出口歐盟的茶葉中又查出鄰苯基苯酚這一防腐殺菌 劑，鄰苯基苯酚是一種能夠致癌的物質(zhì)，對腎臟會產(chǎn)生毒副作用，危害人體健 康，因此迫切需要建立一種，快捷的方法來測定茶葉中鄰苯基苯酚。鄰苯 基苯酚，又叫做 2-羥基聯(lián)苯(ortho-phenylpheno，簡稱 OPP)，一般為白色片狀或 塊狀，具有一定生物毒性。鄰苯基苯酚具備良好的殺菌殺毒能力，是常用的防 腐劑之一，一般都用在對果蔬類的防腐和保鮮，或者是用于紡織品、橡膠制 品、化妝品等當(dāng)中的消毒劑和防腐劑。目前，OPP 殘留檢測的主要方法有液相 色譜法[4-7]、氣相色譜法或氣相色譜-質(zhì)譜法[8-10]。色譜法分析成本高，色譜儀價 格及日常維護費用貴，分析時間一般比較長。而紫外檢測器是普遍的檢測 途徑，大部分物質(zhì)在液體狀態(tài)下都有紫外檢測光譜，其吸光值和其濃度呈現(xiàn) 一定的線性關(guān)系，且不同的物質(zhì)的紫外峰基本都是峰，并且紫外分光光 光度法適合大眾能夠做到的檢測方法，它還擁有分析成本低、紫外檢測儀價 格及日常維護費用低、準(zhǔn)確度高、使用方便等優(yōu)點。 茶葉中因含有大量的營養(yǎng)物質(zhì)和化合物，增加了茶葉前處理的難度。而 茶葉的前處理是整個分析過程的重要步驟，快速的提取方法更是茶葉中 農(nóng)藥殘留分析的核心，直接影響后期檢測方法的準(zhǔn)確度。因此農(nóng)藥殘留分析 茶葉的前處理要求提取率高，盡量少用或不用有機溶劑[11]，以減少污染。常見 的樣品前處理方法主要有干法灰化法、固相萃取法、超聲波提取法等[12-14]，通 過查閱文獻[15-20]，本實驗采用超聲波萃取法作為茶葉的前處理方法。超聲波提 取法是利用超聲波強化提取作用，即媒質(zhì)產(chǎn)生*的機械振動作用和空化作 用，機械振動作用將超聲波的能量傳遞給樣品，使組分脫附和溶解加快；空化 作用使分子運動加快[21]。超聲波提取法操作簡單，并且它擁有操作簡便、提取 效率高，可克服常規(guī)方法的被測成分在多次轉(zhuǎn)移中損失，從而影響檢測準(zhǔn)確 性的缺點。近年來超聲波提取法在茶葉的前處理中有著廣泛應(yīng)用[19-21]。 本文將專門講述先用甲醇：水，甲醇，乙醇溶液分別為提取試劑，并采用 超聲波萃取來提取茶葉中的鄰苯基苯酚，結(jié)合紫外分光光度計分析在不同緩 沖液中，不同 pH 值下鄰苯基苯酚的大吸收峰并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過計算加 標(biāo)回收率確定方法的準(zhǔn)確性。從而建立了一種快速簡便地檢測茶葉中鄰苯基 苯酚含量的方法。 1 實驗部分 1.1 實驗試劑與儀器 1.1.1 試劑 2-苯基苯酚，Rd，Nanqiao Twon，F(xiàn)engxian Shanghai，China；甲醇，AR，國藥 集團化學(xué)試劑有限公司；乙醇，AR，國藥集團化學(xué)試劑有限公司；茶葉，西湖龍 井，浙江省杭州市 1.1.2 儀器設(shè)備 紫外可見分光光度計，UV1901PC，(上海奧析科學(xué)儀器有限公司）；電子天平， ML104/02，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；超聲波清洗器，KQ3200E，昆 山市超聲儀器有限公司 2 結(jié)果與討論 2.1 溶劑（萃取劑）的選擇 鄰苯基苯酚微溶于水，因此選擇了三種不同極性的溶劑[22-23]（甲醇：水，甲 醇，乙醇）來進行比較選出溶劑。 稱取鄰苯基苯酚，在其他制備條件保持不變的前提下，使用三種不同溶 劑：甲醇：水（7:3）、甲醇、乙醇分別配制 6 滋g/mL，分別以不同溶劑作為空白進 行基線的確定，在 190耀400 nm 波長范圍內(nèi)多次進行光譜的連續(xù)掃描，并作出 紫外峰來進行比較?？芍状迹核?:3）紫外吸收峰，并采用其作為溶液的 溶劑（萃取劑）。實驗結(jié)果可知，甲醇：水（7:3），甲醇，乙醇三種萃取劑的標(biāo)準(zhǔn)溶 劑吸收曲線峰形一致，在其他條件不變的是情況下，甲醇：水（7:3）溶劑的紫外 峰大吸收波長處的吸光值，更故采用甲醇：水（7:3）作為樣品的萃取劑。 2.2 OPP 紫外檢測方法優(yōu)化 2.2.1 OPP 大吸收波長的選擇 吸取 2 滋g/mL 的 OPP 溶液于比色皿中，以甲醇：水（7:3）溶劑作為空白進 行基線的確定，在 190耀400 nm 波長范圍內(nèi)多次進行光譜的連續(xù)掃描，如圖 （1），以確定 OPP 的大吸收波長。 

由圖（1）可知，鄰苯基苯酚在 190耀400 nm 范圍內(nèi)，在 201.0、283.5 nm 波 長處均有吸收峰，其中以 201.0 nm 處的吸收峰，無雜峰干擾且較為穩(wěn)定， 適合作為大吸收波長進行實驗。 2.2.2 OPP 適宜緩沖液的選擇 在三組 6 滋g/mL 的 OPP 溶液分別加入 pH=8.5 的不同的緩沖液（BR 緩沖 液，PBS 緩沖液，醋酸緩沖液），分別加入于比色皿中，以甲醇：水（7:3）溶劑作 為空白進行基線的確定，在其他制備條件保持不變的前提下，在 190耀400 nm 波長范圍內(nèi)多次進行光譜的連續(xù)掃描，通過其紫外峰的大吸收峰來確定 適宜的緩沖液。實驗結(jié)果可知，三種不同緩沖液（BR 緩沖液，PBS 緩沖液，醋酸 緩沖液）對于 OPP 標(biāo)準(zhǔn)液的影響的不同程度，其中醋酸緩沖液所得吸光值 大，但因其大吸收波長處也導(dǎo)致偏離，故選用 BR 緩沖液作為 OPP 溶液的 適宜緩沖液。 2.2.3 OPP 適宜緩沖液 pH 值的選擇 通過查閱文獻可知[24]，在酸性條件下,pH 對 OPP 的紫外吸收影響不大，故 在 6滋g/mL 的 OPP 溶液中加入 pH 值為 6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10 的 BR 緩沖 液，并測其大吸收峰。根據(jù)不同 pH 值測得的吸光度繪制 pH 值與吸光度的 變化關(guān)系。得出 6 滋g/mL OPP 標(biāo)準(zhǔn)溶液在不同 pH 值下 BR 緩沖液的吸光值， 可知 OPP 標(biāo)準(zhǔn)溶液在 pH=7.5 下的吸光值。 2.3 OPP 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 從上述 OPP 儲備液（200.0 滋g/mL）標(biāo)準(zhǔn)溶液中吸取 0.1、0.2、0.3、0.4、 0.5、0.6、1mL 定容于 10mL 容量瓶，配制 2、4、6、8、10、12、20 滋g/mL 質(zhì)量濃度 的標(biāo)準(zhǔn)溶液。從 2 滋g/mL 標(biāo)準(zhǔn)溶液中吸取 5mL 定容于 10mL 容量瓶中配制 1滋g/mL 溶液。從 20滋g/mL 標(biāo)準(zhǔn)溶液中吸取 0.1、0.25、0.75mL 定容至 10mL 容 量瓶中配制 0.2、0.5、1.5滋g/mL 溶液。從 1滋g/mL 標(biāo)準(zhǔn)溶液中吸取 0.2、0.4、0.6、 0.8、1、1.2mL 定容至 10mL 容量瓶中配制 0.02、0.04、0.06、0.08、0.10、0.12滋g/ mL 溶液。標(biāo)準(zhǔn)溶液均用甲醇：水（7:3）定容，采用緩沖液的 pH 值，并在 大吸收波長處進行紫外掃描得出 OPP 標(biāo)準(zhǔn)曲線并計算出線性相關(guān)系方程如 圖（2）。 

測定不同濃度鄰苯基苯酚標(biāo)準(zhǔn)品溶液在大吸收波長處的吸光值，繪制 標(biāo)準(zhǔn)曲線圖（2），可知鄰苯基苯酚濃度與吸光度沒有呈直線關(guān)系，通過分析， 取 lgC 為橫坐標(biāo)，A 為縱坐標(biāo)，并擬合得到回歸方程：y = 0.3x + 1.505，線性相 關(guān)系數(shù)為 0.994。由圖（2）可以看出當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度在 0.02耀12滋g/mL 范圍 內(nèi)，鄰苯基苯酚標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性關(guān)系良好。說明使用該曲線測定待測樣品的 鄰苯基苯酚含量具有較高的準(zhǔn)確性。 2.4 樣品的預(yù)處理與測定 2.4.1 樣品的預(yù)處理 稱取 0.1g 茶葉樣品，碾碎于離心瓶中加入甲醇：水（7：3）萃取劑 10mL，在 超聲波清洗器中超聲提取 20 分鐘，將萃取劑倒出在 10mL 燒杯中備用。 2.4.2 樣品的測定和樣品加標(biāo)回收率的測定 提取超聲后的萃取劑 0.1 mL 稀釋至 10 mL,加入 BR 緩沖液，以甲醇：水 （7:3）溶劑作為空白進行基線的確定，作出樣品的紫外峰與 OPP 標(biāo)準(zhǔn)溶液的 紫外峰圖進行比較。 量取上述稀釋后樣品溶液均勻液體試樣 5 mL，裝入比色皿中在大波長 處進行紫外掃描，確定空白樣品中 OPP 的含量。然后分別量取 3 份均勻液體 試樣 5mL，加入 5 mL 質(zhì)量濃度為 0.5、2、8 滋g/mL 的 OPP 溶液。以甲醇：水（7: 3）溶劑作為空白進行基線的確定，采用緩沖液的 PH 值，在大波長處進 行紫外掃描。每組回收率測定 3 次，取平均值進行計算，計算結(jié)果如表 1 所 示，由此可見，其加標(biāo)回收率范圍在 90.1%耀91.2%，回收率在正常范圍內(nèi)，符合 加標(biāo)回收率的標(biāo)準(zhǔn)，證明方法是可行的。

為確定茶葉中是否有其他物質(zhì)干擾影響實驗結(jié)果的測定，分別配制兒茶 素、維生素 C 6滋g/mL，取 1mL 裝入比色皿中，作出三種物質(zhì)的紫外吸 收峰，和 OPP 標(biāo)準(zhǔn)溶液的紫外峰圖進行比較，觀察是否對大波長處的吸收 峰有影響。實驗證明上述物質(zhì)對該檢測方法均無干擾。 3 總結(jié) 本實驗建立了茶葉中的鄰苯基苯酚含量的測定方法，具有準(zhǔn)確性和穩(wěn)定 性。利用甲醇:水（7:3）作為萃取劑，萃取方法選擇超聲波萃取法，萃取出茶葉 中的鄰苯基苯酚，并采用紫外分光光度法，建立鄰苯基苯酚標(biāo)準(zhǔn)曲線對其進 行含量測定，對標(biāo)準(zhǔn)曲線的萃取劑，緩沖液，適宜 pH 值等條件進行優(yōu)化。在 在 0.02耀12滋g/mL 范圍內(nèi)，鄰苯基苯酚濃度與吸光度具有良好線性關(guān)系，其相 關(guān)系數(shù)為 0.994，加標(biāo)回收率在 90.1%耀91.2%之間，符合加標(biāo)回收率的標(biāo)準(zhǔn)，證 明方法是可行的。結(jié)論為通過超聲波萃取結(jié)合紫外分光光度法能夠測定